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AnboStart Taq DNA聚合酶是抗Taq单克隆抗体和Taq DNA聚合酶的混合制品。高温加热前，抗Taq单克隆抗体与Taq聚合酶结合从而抑制聚合酶的活性，达到抑制低温条件下由引物的非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增作用。当扩增反应体系被加热到95℃ 2min时，聚合酶活性因抗Taq单克隆抗体变性而得到恢复，因此无需特殊失活处理，在常规PCR反应条件下即可使用。通过与改良的Buffer配合使用，快速激活，能有效增加反应产物的量和提高PCR反应灵敏度和特异性。可应用与热启动PCR，扩增复杂模板，低拷贝目的片段扩增。

• PCR反应体系的设置：
  
  • 溶解并混匀PCR反应所需的各种溶液。并放置于冰浴上或冰盒内。建议反应PCR液体分装使用，避免反复冻融。
    
  • 参考下表设置的反应，建议PCR反应体系的配制在冰浴或在冰盒上进行：
    

    成分	用量
    5×AnboStart Taq Buffer(含Mg2+)	10μL
    dNTP(各2.5mM)	4μL
    模板DNA	X μL
    正向引物(20μM)	1μL
    反向引物(20μM)	1μL
    AnboStart Taq DNA Polymerase(5U/μL)	0.5～1μL
    双蒸水	至50μL

    对于不同类型的模板在50μL反应体积中推荐用量如下：
    

    • 哺乳动物基因组DNA：0.1～1μg；
      
    • 大肠杆菌基因组DNA：10～100ng；
      
    • 质粒DNA：0.1～10ng。

    过多的模板DNA容易导致非特异性的PCR产物。
  • 用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。
    
  • 各设置好的PCR反应管置于PCR仪上，开始PCR反应。
• PCR反应参数的设置以扩增1kb目的片段为例：
  

  步骤	温度	时间	循环数
  预变性	95℃	3min	1
  变性	95℃	30s	35
  退火	(Tm-5)°C	30s
  延伸	72℃	1min
  最终延伸	72℃	10min	1
  保存	4℃	forever	-

  • PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的PCR反应条件包括温度、时间和循环数等。
    
  • 延伸的时间设置需根据PCR产物的长度进行设置，通常每kb产物的延伸时间为1分钟。例如PCR产物的长度为1kb，则延伸时间可以设置为1分钟，PCR产物的长度为2kb，则延伸时间可以设置为2分钟，以此类推。
    
  • 对于初次进行的PCR，为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物，可以把循环数设置为35。对于需进行半定量或定量的PCR反应循环数一定要进行适当优化，使PCR反应达到平台期。